苯酚(Phenol,C6H5OH)[1]是一種具有特殊氣息的無色針狀晶體,[2]有毒,是消費某些樹脂、殺菌劑、防腐劑以及藥物(如阿司匹林)的重要原料。也可用于消毒外科器械和排泄物的處置,[3]皮膚殺菌、止癢及中耳炎。熔點43℃,常溫下微溶于水,易溶于有機溶劑;當溫度高于65℃時,能跟水以恣意比例互溶。苯酚有腐蝕性,接觸后會使局部蛋白質變性,其溶液沾到皮膚上可用酒精洗濯。[4]小部分苯酚暴露在空氣中被氧氣氧化為醌而呈粉紅色。遇三價鐵離子變紫,通常用此方法來檢驗苯酚。
2017年10月27日,世界衛(wèi)生組織國際癌癥研討機構發(fā)布的致癌物清單初步整理參考,苯酚在3類致癌物清單中。[5]
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苯酚是德國化學家龍格(Runge F)于1834年在煤焦油中發(fā)現(xiàn)的,故又稱石炭酸(Carbolic acid)。使苯酚初次聲名遠揚的應歸功于英國著名的醫(yī)生里斯特。里斯特發(fā)現(xiàn)病人手術后死因多數(shù)是傷口化膿感染。偶然之下用苯酚稀溶液來噴灑手術的器械以及醫(yī)生的雙手,結果病人的感染情況顯著減少。這一發(fā)現(xiàn)使苯酚成為一種強有力的外科消毒劑。里斯特也因此被譽為“外科消毒之父”。
苯酚分子由一個羥基直接連在苯環(huán)上構成。由于苯環(huán)的穩(wěn)定性,這樣的結構幾乎不會轉化為酮式結構[6]。
苯酚共振結構如右上圖。酚羥基的氧原子采用sp2雜化,提供一對孤電子與苯環(huán)的6個碳原子共同構成離域鍵。大π鍵加強了烯醇的酸性,羥基的推電子效應又加強了O-H鍵的極性,因此苯酚中羥基的氫可以電離出來。
苯酚鹽負離子則有如右下圖共振結構:
摩爾折射率:28.13
摩爾體積(m3/mol):87.8
等張比容(90.2K):222.2
表面張力(dyne/cm):40.9
極化率:11.15[6]
相對蒸氣密度(空氣=1):3.24
折射率1.5418
飽和蒸氣壓(kPa):0.13(40.1℃)
熄滅熱(kJ/mol):3050.6
臨界溫度(℃):419.2
臨界壓力(MPa):6.13
辛醇/水分配系數(shù)的對數(shù)值:1.46
爆炸上限%(V/V):8.6
引燃溫度(℃):715
爆炸下限%(V/V):1.7
溶解性:可混溶于醚、氯仿、甘油、二硫化碳、凡士林、揮發(fā)油、強堿水溶液。常溫時易溶于乙醇、甘油、氯仿、乙醚等有機溶劑,室溫時稍溶于水,與大約8%水混合可液化,65℃以上能與水混溶,幾乎不溶于石油醚。[1]
可吸收空氣中水分并液化。有特殊臭味,極稀的溶液有甜味。腐蝕性極強?;瘜W反響才干強。與醛、酮反響生成酚醛樹脂、雙酚A,與醋酐;水楊酸反響生成醋酸苯酯、水楊酸酯。還可中止鹵代、加氫、氧化、烷基化、羧基化、酯化、醚化等反響。苯酚在通常溫度下是固體,與鈉不能順利發(fā)作反響,假設采用加熱凝結苯酚,再參與金屬鈉的方法中止實驗,苯酚易被恢復,在加熱時苯酚顏色發(fā)作變化而影響實驗效果。有人在教學中采取下面的方法實驗,操作簡單,取得了滿意的實驗效果。在一支試管中參與2-3毫升無水乙醚,取黃豆粒大小的一塊金屬鈉,用濾紙吸干表面的煤油,放入乙醚中,可以看到鈉不與乙醚發(fā)作反響。然后再向試管中參與少量苯酚,振蕩,這時可觀察到鈉在試管中疾速反響,產(chǎn)生大量氣體。這一實驗的原理是苯酚溶解在乙醚中,使苯酚與鈉的反響得以順利中止。
苯酚屬于酚類物質,有弱酸性,能與堿反響:
PhOH+NaOH→PhONa+H2O
苯酚Ka=1.28×10-10,酸性介于碳酸兩級電離之間,因此苯酚不能與NaHCO3等弱堿反響:
PhOˉ+CO2+H2O→PhOH+HCO3ˉ
此反響現(xiàn)象:二氧化碳通入后,溶液中呈現(xiàn)白色混濁。
緣由:苯酚因溶解度小而析出。
苯酚遇三氯化鐵溶液顯紫色,緣由是苯酚根離子與Fe構成了有顏色的配合物。
6PhOH+FeCl3→H3[Fe(OPh)6](紫色)+3HCl
親電取代
苯酚由于結構中有苯環(huán),可以在環(huán)上發(fā)作類似苯的親電取代反響,如硝化、鹵代等:對比苯的相應反響可以發(fā)現(xiàn),苯酚環(huán)上的取代比苯容易得多。這是由于羥基有給電子效應,使苯環(huán)電子云密度增加。
值得留意的是,苯酚的親電取代總是發(fā)作在羥基的鄰位和對位。這是羥基等給電子基團的共性。
酚羥基上的取代
酚羥基上的氫原子可以被含碳基團取代,生成醚或酯。
苯酚在空氣中久置會變?yōu)榉奂t色,是由于生成了苯醌:
苯酚的氧化產(chǎn)物普通是對苯醌。這個反響也可以用Br2作氧化劑。
苯酚最早是從煤焦油回收,目前絕大部分是采用合成方法。到20世紀60年代中期,開端采用異丙苯法消費苯酚、丙酮的技術道路,已展開占世界苯酚產(chǎn)量的一半,目前采用該工藝消費的苯酚已占世界苯酚產(chǎn)量的90%以上。其他消費工藝有甲苯氯化法、氯苯法、磺化法。我國的消費方法有異丙苯法和磺化法兩種。由于磺化法消耗大量硫酸和燒堿,我國也將只保管少數(shù)磺化法裝置,逐步以異丙苯法消費為主。
以苯為原料,用硫酸中止磺化生成苯磺酸,用亞硫酸中和,再用燒堿中止堿熔,經(jīng)磺化和減壓蒸餾等步驟而制得。原料消耗定額:純苯1004kg/t、硫酸(98%)1284kg/t、亞硫酸鈉1622kg/t、燒堿(折100%)1200kg/t。
丙烯與苯在三氯化鋁催化劑作用下生成異丙苯,異丙苯經(jīng)氧化生成過氧化異丙苯,再用硫酸或樹脂合成。同時得到苯酚和丙酮。每噸苯酚約聯(lián)產(chǎn)丙酮0.6t。原料消耗定額:苯1150kg/t、丙烯600kg/t,產(chǎn)率百分之七八十。
氯苯在高溫高壓371攝氏度下與苛性鈉水溶液中止催化水解,生成苯鈉,再用酸中和得到苯酚。
由煤焦油粗酚精制而得。
苯在固體鉬催化劑存在下,高溫下中止氯氧化反響,生成氯苯和水,氯苯中止催化水解,得到苯酚和氯化氫,氯化氫循環(huán)運用。[4]
甲苯在鈷鹽催化劑的作用下,用空氣氧化生成苯甲酸,然后在銅催化劑的作用下苯甲酸再與空氣和水蒸汽作用轉化為苯酚和二氧化碳。
苯酚對皮膚、粘膜有劇烈的腐蝕作用,可抑止中樞神經(jīng)或損傷肝、腎功用。急性中毒:吸入高濃度蒸氣可致頭痛、頭暈、乏力、視物模糊、肺水腫等。誤服惹起消化道灼傷,呈現(xiàn)炙烤痛,呼出氣帶酚味,嘔吐物或大便可帶血液,有胃腸穿孔的可能,可呈現(xiàn)休克、肺水腫、肝或腎損傷,呈現(xiàn)急性腎功用衰竭,可死于呼吸衰竭。眼接觸可致灼傷??山?jīng)灼傷皮膚吸收經(jīng)一定潛伏期后惹起急性腎功用衰竭。慢性中毒:可惹起頭痛、頭暈、咳嗽、食欲減退、惡心、嘔吐,嚴重者惹起蛋白尿??芍缕ぱ?。
環(huán)境危害:對環(huán)境有嚴重危害,對水體和大氣可構成污染。
燃爆風險:該品可燃,高毒,具強腐蝕性,可致人體灼傷。
1 皮膚接觸:立即脫去污染的衣著,用甘油、聚乙烯乙二醇或聚乙烯乙二醇和酒精混合液 (7:3)抹洗,然后用水徹底清洗。或用大量活動清水沖洗至少15分鐘。就醫(yī)。
2 眼睛接觸:立即提起眼瞼,用大量活動清水或生理鹽水徹底沖洗至少15分鐘。就醫(yī)。
吸入:疾速脫離現(xiàn)場至空氣新穎處。堅持呼吸道通暢。如呼吸困難,給輸氧。如呼吸中止,立即中止人工呼吸。就醫(yī)。
3 食入:立即給飲植物油15~30mL。催吐。就醫(yī)。
1 風險特性:遇明火、高熱可燃。
2 有害熄滅產(chǎn)物:一氧化碳、二氧化碳。
3 滅火方法:消防人員須佩戴防毒面具、穿全身消防服,在上風向滅火。
4 滅火劑:水、抗溶性泡沫、干粉、二氧化碳。
1 應急處置:隔離透露污染區(qū),限制出入。切斷火源。建議應急處置人員戴防塵面具(全面罩),穿防毒服。
2 小量透露:用干石灰、蘇打灰掩蓋。
3 大量透露:搜集回收或運至廢物處置場所處置。
1 操作留意事項:密閉操作,提供充分的局部排風。盡可能采取隔離操作。操作人員必需經(jīng)過特地培訓,嚴厲遵守操作規(guī)程。建議操作人員佩戴自吸過濾式防塵口罩,戴化學安全防護眼鏡,穿透氣型防毒服,戴防化學品手套。遠離火種、熱源,工作場所嚴禁吸煙。運用防爆型的通風系統(tǒng)和設備。避免產(chǎn)生粉塵。避免與氧化劑、酸類、堿類接觸。搬運時要輕裝輕卸,防止包裝及容器損壞。配備相應品種和數(shù)量的消防器材及透露應急處置設備。倒空的容器可能殘留有害物。
5.2 儲存留意事項:儲存于陰涼、通風的庫房。遠離火種、熱源。避免光照。庫溫不超越30℃,相對濕度不超越70%。包裝密封。應與氧化劑、酸類、堿類、食用化學品分開存放,切忌混儲。配備相應品種和數(shù)量的消防器材。儲區(qū)應備有適合的材料收容透露物。應嚴厲執(zhí)行極毒物品“五雙”管理制度。
美國TWA:19mg/m3,ACGIH 美國IDLH:100ppm 英國TWA :19mg/m3, HSE 德國MAC :19mg/m3,DFG 前蘇聯(lián)MAC :0.01mg/m3( 居民區(qū)測定:用氫氧化鈉搜集在起泡器內,用硫酸解吸后中止氣相色譜分析
前蘇聯(lián) MAC:0.001mg/l(飲用水) 中國 MAC:0.002mg/l
測定:用二氯甲烷萃取,用帶火焰離或電子探測器的的 氣相色譜儀分析或氣相色譜加質譜儀分析
1. 在試管中取2mL苯酚溶液,滴加石蕊試劑,觀察現(xiàn)象。
2. 在三支試管中分別取少量苯酚固體,并分別向其中參與2—3毫升氫氧化鈉溶液、2—3mL碳酸鈉溶液、2—3mL碳酸氫鈉溶液,充分振蕩,觀察并比較現(xiàn)象(留意加鹽溶液的試管中能否有氣泡。)
3. 在試管中取2mL氫氧化鈉溶液,滴加2—3滴酚酞試液,再參與少量苯酚固體,觀察顏色變化。
1. 苯酚不能使石蕊變紅。
2. 苯酚固體易溶于氫氧化鈉溶液和碳酸鈉溶液,無氣泡產(chǎn)生;難溶于碳酸氫鈉溶液。
3. 苯酚使紅色溶液(滴有酚酞試液的氫氧化鈉溶液)逐漸變淺。
苯酚具有弱酸性,酸性介于碳酸和碳酸氫根離子之間。由于苯酚的酸性太弱,致使于不能使石蕊試劑變紅。(石蕊試液的變色范圍是:pH值5~8)
在剛才制取的苯酚溶液中邊振蕩邊逐滴參與氫氧化鈉溶液,至恰恰廓清,生成物為苯酚鈉。再持續(xù)通入二氧化碳氣體,溶液又變混濁(二氧化碳與水生成碳酸,碳酸與苯酚鈉反響生成苯酚與碳酸氫鈉)。
綜上所述,根據(jù)強酸制弱酸的原理可知酸性: H2CO3 > > NaHCO3 。亦可知碳酸的酸性比苯酚的酸性強。
苯酚是重要的有機化工原料,用它可制取酚醛樹脂、己內酰胺、雙酚A、水楊酸、苦味酸、五氯酚、2,4-D、己二酸、酚酞n-乙酰乙氧基苯胺等化工產(chǎn)品及中間體,在化工原料、烷基酚、合成纖維、塑料、合成橡膠、醫(yī)藥、農(nóng)藥、香料、染料、涂料和煉油等工業(yè)中有著重要用途。此外,苯酚還可用作溶劑、實驗試劑和消毒劑,苯酚的水溶液可以使植物細胞內染色體上蛋白質與DNA分別,便于對DNA中止染色。
【用法與用量】
1.器械消毒及排泄物處置1%~5%水溶液。
2.皮膚殺菌與止癢:2%軟膏涂患處。
普遍用于制造酚醛樹脂、環(huán)氧樹脂、錦綸纖維、增塑劑、顯影劑、防腐劑、殺蟲劑、殺菌劑、染料、醫(yī)藥、香料和炸藥等
【制劑與規(guī)格】
1.苯酚軟膏:2%。
【給藥說明】本品對組織穿透力強,僅在小面積皮膚上運用。高濃度外用可惹起組織損傷,以致壞死。水溶液用于體表,濃度不宜超越2%,外用后不加封包。
【不良反響】本品對組織有腐蝕性和刺激性。曾報道在通風較差的場所,以苯酚消毒清潔搖籃和床墊等,惹起重生兒高膽紅素血癥,對嬰兒已證明有致命性。
【忌諱證】尿布皮炎患兒及6個月以下嬰兒禁用。避免應用在破損皮膚和傷口。
【特性】一種重要的苯系中間體。又稱石炭酸。低熔點(40.91℃)白色 晶體 ,在空氣中放置及光照下變紅 ,有臭味,沸點181.84℃。對人有毒,要留意防止觸及皮膚。工業(yè)上主要由異丙苯制得。苯酚產(chǎn)量大,1984年,世界總消費才干約為5兆噸。苯酚用途普遍。第一次世界大戰(zhàn)前,苯酚的獨一來源是從煤焦油中提取。絕大部分是經(jīng)過合成方法得到。有磺化法、氯苯法、異丙苯法等方法。分子結構: 苯環(huán)上的C原子以sp2雜化軌道成鍵,O原子以sp3雜化軌道成鍵。 苯酚主要用于制造酚醛樹脂 ,雙酚A及己內酰胺。其中消費酚醛樹脂是其最大用途 ,占苯酚產(chǎn)量一半以上 。此外,有相當數(shù)量的苯酚用于消費鹵代酚類。從一氯苯酚到五氯苯酚,它們可用于消費2,4-二氯苯氧乙酸( 2,4-滴 )和 2,4,5-三氯苯氧乙酸(2,4,5-涕 )等除草劑;五氯苯酚是木材防腐劑;其他鹵代酚衍生物可作為殺螨劑、皮革防腐劑和殺菌劑 。由苯酚所制得的烷基苯酚是制備烷基酚-甲醛類聚合物的單體,并可作為抗氧劑、非離子表面活性劑、增塑劑、石油產(chǎn)品添加劑。苯酚也是很多醫(yī)藥(如水楊酸、阿司匹林及磺胺藥等)、合成香料、染料(如分散紅3B)的原料。此外,苯酚的稀水溶液可直接用作防腐劑和消毒劑。
貯存方法
1、儲存于陰涼、通風的庫房。遠離火種、熱源。避免光照。庫溫不超越30℃,相對濕度不超越70%。包裝密封。
2、應與氧化劑、酸類、堿類、食用化學品分開存放,切忌混儲。配備相應品種和數(shù)量的消防器材。
3、儲區(qū)應備有適合的材料收容透露物。應嚴厲執(zhí)行極毒物品“五雙”管理制度。
關于苯酚降解的研討,國外起步較早。
到目前為止,曾經(jīng)有許多苯酚降解菌株得到了分別和研討。
目前已分別審定的微生物包括根瘤菌(rhizobia)、藻類 (alga Ochromaonas)、酵母菌(Yeast trichosporon)、醋酸鈣不動桿菌 (A.calcoaceticus)、 假單胞菌 (pseudomonas.Sp)、真養(yǎng)產(chǎn)堿菌(Alcaligenes eutrophus)、 反硝化菌(Denitrifying bacteria)等苯酚降解菌。
最常見的酚降解菌是假單胞菌(Pseudomonas)和不動桿菌(Acinetobacter),它們對酚的最大降解濃度普通在 1 200 mg/L 以下。 沈錫輝等分別到 1 株能以苯酚、苯甲酸、對甲 酚、苯為獨一碳源和能源生長、具有同時降解單環(huán)和 雙環(huán)芳烴才干的細菌菌株,經(jīng)生理生化、16SrRNA 基 因序列分析等審定為紅球菌 PNAN5 菌株。在溫度為 20~40 ℃,pH7.0~9.0 范圍內該菌株降解苯酚的效率 堅持在 80% ~100%之間,苯酚濃度在 2~10 mmol/L 范圍內變化對降解效率沒有明顯的影響。該菌株通 過鄰苯二酚 1,2—雙加氧酶催化的開環(huán)途徑降解芳 烴,不同于已知的混濁紅球菌,后者是經(jīng)過鄰苯二酚 2,3—雙加氧酶催化芳烴降解。
討論了初始苯酚濃度、TOC 以及酵母生物量間的相互關系。結果標明,苯酚的降解同酵母 生長有極大的相關性,初始苯酚濃度升高,抑止酵母 生物量增加,轉化率降落;在苯酚的降解過程中,TOC 的降落與苯酚同步,苯酚完好降解后 TOC 主要來 自酵母代謝產(chǎn)物。
關于初始苯酚質量濃度為 559.0 mg/L 的培育液, 降解 90%的苯酚可獲得酵母 (生物量)328.2 mg/L, 并可使培育液 TOC 降解約 87.3%。分別出 9 株好 氧降酚顆粒,編號為Ⅰ1-Ⅰ9,經(jīng) 16SrRNA 基因序列 分析審定,包含了醋酸鈣不動桿菌屬、假單胞菌屬、芽 抱桿菌屬,除了Ⅰ3 外均表現(xiàn)出高效降酚才干,Ⅰ1 和 Ⅰ5 菌株在苯酚濃度為 500 mg/L 時,與其他菌株相 比具有很快的生長速度,Ⅰ2,Ⅰ6 和Ⅰ8 菌株則表現(xiàn) 出很強的聚集才干,并且隨著 pH 值的升高這種能 力削弱,Ⅰ3 菌株與其他相比降酚才干低,但是可以 增強Ⅰ2 和Ⅰ8 菌株的聚集才干。
在低濃度含氧條件下分別 出 27 株降酚菌,苯酚作為單一碳源和能源,表現(xiàn)出既具 有降酚才干同時又具有降低硝酸鹽含量的才干,結果表 明好氧降解 50 μmol 苯酚同時有 140~200 μmol 硝酸 鹽的減少。從巴西東北部地域的煉油廢水中分別出好氧降酚菌,熱帶假絲酵母菌可 以在苯酚濃度為 500 mg/L 或者 1 000 mg/L 的環(huán)境 中生存,并且以苯酚作為獨一碳源,隨著濃度的增 加,降解處置所需時間越長,在處置中期菌株釋放出 大量的多糖以削弱高濃度苯酚的毒害作用,結果標明這種菌株既具有很強的苯酚降解才干同時可以作為一種表面活性劑,為處置含油廢水提供參考。從工業(yè)含酚廢水中分 離出來的熱帶假絲酵母菌可以處置濃度為 1 000 mg/L 的苯酚,并對其生長進行了動力學分析
結果標明,在參數(shù)為 μmax=0.174/h,KS=11.2 mg/L,Ki=298 mg/L 時生長最佳。從活性污泥中成功分別出一種 新的苯酚降解菌 EDP3,可以在含有苯酚、苯甲酸鈉、 對羥基苯甲酸、苯乙酸、苯、乙苯、苯甲醇等的有氧環(huán) 境中生長,在室溫 25 °C 時可以降解 1 000 mg/L 的苯酚。從受紙漿廢水污染的土壤里分別得到假單胞菌 MTCC 4996 可以在 156 h 內降解濃 度高達 1 300 mg/ L 的苯酚廢水,完好降解的 pH 變 化范圍是 6.0~7.0,溫度范圍是 15~ 45 ℃,最佳降解條 件是 pH 為 7.0,溫度為 37 ℃,振蕩速率為100~125 r/ min 時完好降解需求 66 h,而靜止狀態(tài)則需求 84 h, 低濃度的葡萄糖和蛋白胨可以進步苯酚處置效果, 苯酚的降解速率與添加的金屬離子有關,低濃度的 Fe,Cu,Pb,Zn,Mn,Hg 可以進步降解速率。在有氧環(huán)境中分別出的 產(chǎn)堿桿菌 P5 在有氧氣和硝酸鹽存在的條件下最大 降酚濃度為 0.29 mmol/L,但是在只需氧氣存在的條 件下僅有 0.16 mmol/L。 分別出的好氧醋酸鈣不動桿 菌,可以高效降解高濃度苯酚,在具有熱敏理性的黏 附素蛋白參與下該菌還具有高效的聚集性。
在 SBR 處置系統(tǒng)中連續(xù)培育 1 周,這種降解菌可以固定化 成 2~3 mm 的顆粒,具有穩(wěn)定的屬性并且可以處置 200~2 000 mg/L 的苯酚。相應的在 VSS 中的降酚速 率是 993.6 和 519.3 mg/d,同時單一的菌株也可以在 1 500 mg/L 苯酚濃度下生存,經(jīng)過共聚焦激光掃描 顯微鏡測試顯現(xiàn),醋酸鈣不動桿菌主要存活在距外 表面 200~250 μm 以下,并有胞外聚合物掩蓋以抵御 苯酚的毒性,對聚集中止的分析測試標明有可能是 分泌蛋白的作用。[7]
苯酚降解基因的研討現(xiàn)狀
苯酚的降解基因通常成簇排列,位于大質粒上或染色體上。在好氧菌中,苯酚羥化酶基因是降解苯 酚的關鍵基因,編碼苯酚降解途徑的第一個酶,擔任 將苯酚轉化為鄰苯二酚;將鄰苯二酚開環(huán)裂解為三 羧酸(TCA)產(chǎn)物,是由鄰位和間位酶擔任的。鄰苯二 酚的進一步降解具有不同的途徑和酶系統(tǒng):鄰苯二 酚 2,3-雙加氧酶 (C23O,間位裂解),或鄰苯二酚 1,2-雙加氧酶 (CatA,鄰位裂解)。
這類雙加氧酶 (C23O,CatA),分別由 C23O 和 CatA 等雙加氧酶基 因編碼,它們在不同的降解菌中具有高度的同源性。從白色念珠菌 TL3 中提取出鄰苯二酚 1,2-雙加氧酶,它具有很高 的耐酚性和高效的降酚性能。它是由 puriWed 酶通 過硫酸銨沉淀,葡聚糖 G-75 凝膠 Wltration 和 HiTrap Q 瓊脂糖凝膠柱層析得到。最佳生存溫度和 pH 值分 別是 25 °C 和 8.0。
對底物分析顯現(xiàn) puriWed 酶是鄰 苯二酚 1,2-雙加氧酶的一種,鄰苯二酚 1,2-雙加氧 酶的多肽測序片段和 MALDI-TOF/TOF 總量測定為 BLAST 分析提供了氨基酸序列信息,BLAST 分析結 果顯現(xiàn)鄰苯二酚 1,2-雙加氧酶與從念珠菌中得到 的 CaO19_12036 蛋白質具有高度的同源性。
運用功用 性基因分析技術定量評價生物反響器中的苯酚羥 化酶多樣性。首先對實驗室范圍的活性污泥中的細 菌中止苯酚降解遺傳多樣性的定量分析,用參與苯 酚的合成污水喂養(yǎng)首批順式流化床,得到的活性 污泥中提取 DNA 基因組,用于主要亞基苯酚羥化 酶(LmPH)基因的激進擴增,并產(chǎn)生克隆庫。經(jīng)過系 統(tǒng)發(fā)育分析和9 個月的實時 PCR 分析,LmPH 基因 拷貝總數(shù)基本上仍然穩(wěn)定,但是在修訂的苯酚污泥 中,苯酚降解顯著變化的同時 LmPH 基因多樣性也 50 環(huán)境維護與循環(huán)經(jīng)濟 在增加,這標明活性污泥中苯酚降解效率取決于所 別離的一些多余物種的活性。
在 2001 年分別出睪丸酮叢毛單胞 降酚菌 R5,進一步研討 R5 降解途徑的苯酚羥化酶基因(Phc),發(fā)現(xiàn)與其他的苯 酚羥化酶基因具有不同的轉錄調控機制。3 個調理 蛋白參與了轉錄,其中一個是 NtrC 家族中常見的積 極參與調理其他苯酚羥化酶,另一個抑止 Phc 的錯 亂表達,還有一個對 Phc 中止擴增表達。
這個細致的 機制使得降酚菌 R5 表現(xiàn)出了相對高的苯酚充氧活 性,同時也標明降解酶的表達方式也將是多樣化的, 并可能影響合成行為。從受苯酚污染的水體里分 離出苯酚和甲酚降解假單胞菌,經(jīng)過苯酚羥化酶 (LmPH) 和鄰苯二酚 2,3-雙加氧酶的序列分析,同 時依據(jù)質粒傳染 pheBA 子編碼的鄰苯二酚 1,2-雙 加氧酶和單組分苯酚羥化酶的結構,在標明物種的 菌株和遺傳因子的系統(tǒng)分組菌株之間比較 catA 基 因序列,在由 B 遺傳因子得到的 P. Xuorescens 菌株 中 LmPHs 和 C23Os 相似,而在 P. mendocina 菌株中 遺傳異質性卻很明顯,由遺傳因子 C 和 F 得到的 P. Xuorescens 菌株含有 pheBA 遺傳支配子,由遺傳 因子 B 得到的 P. putida 菌株是經(jīng)過 ortho 途徑降解 苯酚的,大多數(shù)的這種菌株也檢測到這種支配子,遺 傳多樣性的代謝基因別離的結果標明幾乎沒有酚醛 化合物降解的中間道路。
將大腸桿菌 S17-1 的 Tn5 轉 座子中獲得的自殺性質粒作為載體與具有抗生素耐 藥性的供體菌的質粒 pAG408 融合,在菌株 HB101 的含有 mob 基因的質粒 pRK600 的輔佐下,綠色熒 光蛋白基因 gfp 經(jīng)過細菌交配轉化到受體假單胞菌 中,假單胞菌從受苯酚污染的工業(yè)廢水中分別得到, 可以降解苯酚,這樣就獲得了既可以降解苯酚又同 時具有耐藥性的工程菌,在紫外光映照下發(fā)出明亮 的綠光,這標明將綠色熒光蛋白基因 gfp 融合到假 單胞菌上不會影響它們的降解性能。
從煉油廠廢水中分別得到醋酸鈣 不動桿菌 PHEA-2,在苯酚及苯甲酸的環(huán)境中富集 馴化培育,研討標明醋酸鈣不動桿菌 PHEA-2 和 NCIB8250 的苯酚羥化酶都屬于一個復雜的酶。經(jīng)過 完好的核苷酸序列,中止 DNA 序列分析標明苯酚羥 化酶的編碼基因 (mph) 及其在醋酸鈣不動桿菌 PHEA -2 中的下游編碼基因與醋酸鈣不動桿菌 NCIB8250 中的不同。在醋酸鈣不動桿菌 PHEA-2 中 可能存在 mph-ben-cat 基因區(qū)。[7]
結論
從受污染的環(huán)境中分別獲得高效的酚類物質降 解菌,研討其降解特性,然后應用到含酚等難降解污 染物的廢水處置系統(tǒng)中,是難降解污染物的廢水處 理的一條有效途徑,將這些降解菌應用在處置廢水 的生物降解反響器、給水設備系統(tǒng)中遭受污染的地 方和廢物傾注處具有普遍的應用前景。[7]
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