固定的目的在于保管細胞和組織的原有形態(tài)構(gòu)造,固定劑能阻止內(nèi)源性溶酶體酶對本身組織和細胞的自溶、抑止細菌和霉菌的生長。固定劑經(jīng)過凝固、生成添加化合物等使蛋白質(zhì)內(nèi)部構(gòu)造發(fā)作改動,從而使酶失活。固定劑對細胞核細胞外成分發(fā)作物理改動。未固定前活細胞被包裹在不能穿透的膜內(nèi),固定劑可以毀壞這一屏障,使大分子物質(zhì)穿透膜、逸出。選擇固定液對組織染色和免疫組化染色都極端重要,通常將幾種固定劑混合配制成復(fù)合固定液,這樣能夠順應(yīng)多種組織、細胞成分的保管,但是目前還沒有一種規(guī)范的固定液適用于一切的組織、細胞成分的保管。固定液主要分為醛類固定液、汞類固定液、醇類固定液、氧化劑類固定液、苦酸鹽類固定液等,較為常用的是醛類中的福爾馬林、醇類中的乙醇。 多聚甲醛溶液(4% PFA)主要由多聚甲醛、磷酸鹽、去離子水組成,pH 為7.4,該固定液合適于絕大多數(shù)組織和細胞的固定。4%多聚甲醛溶液是免疫組織化學和培育細胞固定中最常用的固定液之一,它能較好的維護組織和細胞的形態(tài)構(gòu)造以及核酸。
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